（HPV）感染的诊断与治疗

精子功能指标分析

 传统的精液分析检查主要包括精子密度、活力与活率、形态学指标，在一定程度上反映了男性的生育能力。
但有时精液常规分析的结果的结果与实际生育力之间不尽一致。临床上常发现一些不育病人上述指标是正常的（排除女方因素），但妻子不能怀孕。而精液常规分析精子密度低下者其妻子仍可怀孕。 研究表明，精液常规分析与实际生育力的一致性仅有70%。精子功能指标的测定，更能客观地反映精子的受精能力，是对精液常规分析的必要补充。

精子功能测定主要有：
①精子运动功能指标的测定；
②精子穿卵试验；
③精子-宫颈粘液的相互作用；
④精子膜功能测定；
⑤精子核功能测定；
⑥精子线粒体功能测定；
⑦精子顶体反应和顶体酶活力测定等。 ⑴精子活力的测定及其运动特征的分析 精子活动能力是精子受精的重要指标，因此，客观而准地 分析精子活力在男性不育的临床诊断中占有极为重要的地位。
   在我国，目前临床上仍推荐由训练有素的检验人员严格按照WHO编辑的
 《人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》进行精子活力及活力的测定。但这些测定往往带有一定的主观性、重复性差等不足。
   目前，已发展了一系列客观评价人类精子活力及其运动特征的新技术，如采用浊度分析法、激光散射测量仪、
显微摄像术、连续分步曝光照相术、计算机辅助的精液分析（CASA）技术等。 其中，以CASA技术受到普遍重视，它可以达到客观准确地量化分析精子运动轨迹，获得精子运动的多项参数。
  然而CASA系统受诸多因素影响，如测定精子浓度的准确性受精液中细胞成分和非精子的颗粒物质的干扰，测定活动精子百分率也受精液中非精子物质的干扰，以及由于不同厂家不同类型的CASA系统参数设置的差异而使彼此的检测结果无相比性，加上CASA所反映的是单个精子的运动参数，缺乏对精子群体的了解。因此，当前（1992）仍推荐以直接目测法来判断精子群体活力及其活动精子百分率，使用血球计数器来测定精子数。

精子-宫颈粘液相互作用测定

宫颈粘液是精子在受精过程中需穿越的第一道屏障。
只有月经中期妇女的宫颈粘液才适合于精子的穿透。
影响精子穿透宫颈粘液的因素包括宫颈粘液的理化状态、精浆酶的活性及精子运动的质量。 精子和宫颈粘液相互作用试验分体内试验和体外试验。体内试验即性交后试验（PCT）：体外试验主要包括玻片试验、毛细管试验和精子-宫颈粘液接触试验。CT结果取决于精子与宫颈粘液的相互作用，任何一方的异常均可影响PCR结果。因此，PCT不仅能测定宫颈粘液中的活精子的数量，也可以了解性交后一定时间内精子在女性体内存活和运动情况。毛细管试验操作简便，实验条件易控制，影响因素少，特别是可以作用供者的宫颈粘液或宫颈粘液代用品，可方便地同时检测一批标本。此外，该试验还可以用来鉴别导致PCT结果异常的因素是在男方还是女方，具有很大的临床实用价值。影响毛细管试验的主要因素包括精子质量（精子活动力、形态正常精子百分率）、宫颈粘液的性状、试验时的温度、穿透时间及毛细管放置的位置。
玻片试验的原理和作用类似毛细管穿透试验，区别在于此法在载玻片上直接观察精子对宫颈粘液的穿透，比毛细管法更为简便。

精子顶体反应和顶体酶活力测定
  人类精子在离开男性生殖道时，还不能立即与卵子受精。它必须在雌性生殖道内经历一段成熟过程，才能获得受精能力，这一生理现象称为精子获能。人类精子顶体位于精子头前端，覆盖在精子核前面，由顶体帽和赤道板组成，是一个膜结合的帽状结构。顶体内含有多种蛋白水解酶和磷酸脂酶。获能的精子穿过卵丘细胞外基质时被激活引发顶体反应（AR）将顶体内的酶释放出来以溶解卵放射冠及透明带。精子只有在体内经过获能、顶体反应，才能穿入卵细胞与其融合，完成受精。
    因此，检测精子是否发生顶体反应有助于预测精子的受精能力。 精子顶体酶:是一种特殊的丝氨酸水解蛋白酶，它在引起精子顶体反应、精卵特异性结合、使精子穿过透明带等受精过程中起着关键作用。
   目前，对顶体酶在受精生物学和男性不育中的诊断价值越来越引起人们的重视。检测精子顶体酶的试验主要有凝集素免疫荧光染色法及考马斯亮蓝染色法。前者的检测原理主要是利用钙离子载体A23187诱导精子发生顶体反应，然后用能与精子顶体中含有的大量糖蛋白的糖基结合的豌豆凝集素(PSA）作为探针检测精子顶体反应。后者的检测原理也是利用钙离子载体A23187诱导精子发生顶体反应，发生顶体反应后的精子顶体丢失，顶体区不着色，顶体完整而被考马斯亮蓝染上紫蓝色的精子则为没有发生顶体反应的精子。精子顶体酶活力的测定可直接用明胶法测定精子顶体酶活性，其检测原理是精子在明胶制成的薄膜上孵育后，引起顶体的解聚，释放出顶体酶，将明胶溶解成亮环，酶活性的大小可依据亮环直径大小来判断。
      此外，顶体酶的活性还可通过检测酶活性可反映顶体酶全部活性的存在于精子顶体的精氨酸酰胺酶来确定。其原理是精氨酸酰胺酶以Nα-苯甲酰-DL-精胺酸-ρ-硝酰基苯胺（BAPNA）为底物，分解产生有色产物--硝酰基苯胺，通过测定硝酰基苯胺的产量可推算出精氨酸酰胺酶的活性，从而反映顶体酶的全部活性。

   精卵相互作用的测定 精卵细胞相互作用的评估是评价人类精子受精力最重要、最可信的方法。临床上应用最广泛的精卵相互作用的试验是精子穿去透明带金黄仓鼠卵试验（SPA），简称精子穿卵试验。SPA是测定精子获能、顶体反应、卵膜融合能力以及精子核解聚能力的经典方法，国外已将其作为精子功能的常规检测方法。但由于此实验条件要求高，操作步骤多，技术要求高，国内仅限于研究机构用于研究目的，临床未作常规展开。
在临床实践中，SPA可用于以下几个方面：
①对原因不明的不育者，检测其精子的功能；
②在女方进行强有力的治疗，如促性腺激素治疗和输卵管成形术前，确定其丈夫精子的受精能力；
③估计不育症病人精液异常程度的严重程度、观察治疗效果；
④IVF-ET时，估计供精者精液标本的质量和作受孕率的估计；
⑤检测生殖抗体，如抗精子抗体对生殖的影响；
⑥输精管结扎前，男性受精能力监测；
⑦评价化疗或放疗对男性肿瘤病人生育力的影响；
⑧估计化学药品、环境中的毒物和药物对人精子受精能力的影响。

精子膜功能的测定
在精子功能检测中，精子膜功能试验也引起人们的关注。精子膜上含有丰富的多聚不饱和脂肪酸及多种蛋白成分，精子膜的功能与精子获能、顶体反应及精卵融合密切相关。精子膜功能的测定，可预测精子的受精能力。 反映精子膜结构完整性，常采用活体染色法（台盼兰或伊红Y，死精子染色，活精子不染色）；而反映精子膜生理功能的完整性则采用精子尾部低渗肿胀试验（HOST）。其主要检测原理为：精子在低渗溶液中，必须重新建立内外液体间的平衡，水分子通过精子膜进入精子，使其精子体积增大而膨胀，这是活精子膜功能正常的标志，
而膜功能不全（包括死精子）的精子表现为不膨胀。目前，对HOST的临床价值仍有争议，对是否能预测精子的受精能力有不同的看法，尚需积累更多的资料。
精子核功能的测定
  精子核：是精子重要的细胞器，包涵了父方的遗传物质。精子发生过程中，各期生精细胞核内DNA的含量发生规律性变化，与核DNA结合的核蛋白也发生组型转换（即从组蛋白→过度蛋白→鱼精蛋白）。成熟的精子核内DNA与鱼精蛋白紧密结合，高度浓缩，抑制了基因的表达，使遗传物质保持稳定。精子核成熟度直接影响精子的受精能力和受精后原核的形成及胚胎的着床。

目前，检测精子核功能的主要试验有：
a,精子核DNA荧光染色、
b,精子核染色质抗解聚试验、
c,苯胺蓝染色法检测精子核蛋白组型转换、
d,精子核蛋白组分的测定等。
精子线粒体功能的测定
   精子线粒体位于精子尾部的中段，形成线粒体鞘结构。哺乳类动物每个精子约含有75个线粒体。线粒体是精子运动能量提供的场所。线粒体鞘局部或完全缺失、线粒体的体积及分布异常，都可能使精子运动能力发生障碍